实验编号

112#（高中生物，必修1）

实验名称

绿叶中色素的提取与分离

实验原理

叶绿体中的色素是有机物，不只一种，不溶于水但能溶解在有机溶剂中，如无水乙醇、丙酮等，因此用无水乙醇可提取绿叶中的色素。

层析液是一种溶解性、挥发性都很强的有机溶剂，色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的色素随层析液在滤纸条上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸条上扩散得慢。层析几分钟之后，绿叶中的色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。

目的要求

进行绿叶中色素的提取与分离

探究绿叶中含有色素的种类。

实验材料

新鲜绿叶（如菠菜叶）

实验仪器

试管、试管架、玻璃漏斗、药勺、剪刀、量筒

研钵、毛细吸管、尼龙滤布、棉塞、干燥的定性滤纸

天平

实验试剂

无水乙醇（或丙酮）

层析液，二氧化硅，碳酸钙

方法步骤

（1）提取光合色素

用天平称取5 g绿色叶片，剪碎，放入研钵中。向研钵中放入少量二氧化硅和碳酸钙，加入10 mL无水乙醇（也可用丙酮），迅速、充分地研磨。在玻璃漏斗基部放一块单层尼龙布，将漏斗插入试管。将研磨液倒入漏斗，及时用棉塞塞严盛有滤液的试管。

①剪碎和加二氧化硅的作用：利于研磨充分

②加入碳酸钙的原因：防止色素破坏。研磨时会破坏溶酶体，溶酶体里面的有机酸会流出来而色素中有Mg，碳酸钙能和酸反应，防止酸和镁反应，破坏了色素。

③加入无水乙醇（丙酮）的原因：光合色素易溶于无水乙醇等有机溶剂中，可以用无水乙醇提取绿叶中的光合色素。

④迅速研磨：防止乙醇挥发和色素的破坏。

⑤单层尼龙布的作用：过滤、去除杂质。

⑥用棉塞塞严的原因：防止乙醇（丙酮）挥发、提取液变少、变干。

（2）制备滤条

将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管长与宽的滤纸条，将滤纸条一端剪去两角，在此端距顶端1 cm处用铅笔画一条细横线。

①滤纸条的长与宽略小于试管：既能使滤纸条轻松地放入试管内，易于取出，也能防止滤纸条太小，弯曲塌陷在试管内。

②剪去滤纸条两角的作用：1.保证滤纸能立在烧杯中2.保证滤纸上的滤液线能水平向上扩展。

③1 cm：保证滤纸条有足够的长度泡在层析液中，又能使色素带不浸在层析液（分离液）中。

④用铅笔，不能用签字笔、圆珠笔、画笔的原因：签字笔、圆珠笔、画笔的笔液色素会也能溶于乙醇和层析液，污染从绿叶中提取的色素。

（3）画滤液细线

用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画细线（也可用玻片较短那一端的边缘沾取滤液后，印在滤纸条上）。待滤液线干后，重复画线一两次。

①滤液线要细，要均匀：保证滤液色素在同一起始点上。

②待滤液线干后再重复画线的原因：既保证了滤液线的色素量，也防止滤液线过宽。画的次数越多，色素量越多，越好跑，色素带也就分得越开，越清楚。

（4）分离光合色素

将适量的层析液（分离液）倒入试管，将滤纸条画线一端朝下，轻轻插入层析液中，迅速塞紧试管口。

①适量的层析液：保证足量用于色素的分离，防止层析液浸没滤液线，也防止空气污染（层析液易挥发、有毒），避免试剂的浪费。

②层析液的作用：色素可溶于层析液中，不同的色素在层析液中的溶解度不同。溶解度高的色素随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低的色素在滤纸上扩散得慢。这样，最终不同的色素会在扩散过程中分离开来。

③注意不要让层析液触及滤液线。接触后会使大量滤液溶于层析液中，导致实验失败。

④塞紧试管口的原因：层析液易挥发，且具一定的毒性。

（5）观察、记录

待层析液上缘扩散至接近滤纸条顶端时，将滤纸条取出，风干。观察滤纸条上所出现的色素带及其颜色，并做好记录。

最后滤纸条上将分离出四条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，四种色素分别是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b。

实验现象

实验结论