实验编号

410#（高中生物，选修1）

实验名称

DNA的粗提取与鉴定

实验原理

DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。

DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

目的要求

学会DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。

实验材料

鸡血细胞液5ml~10ml）

实验仪器

1. 铁架台 2. 玻璃棒(1个) 3. 滤纸 4. 量筒（100ml，1个）5. 烧杯(100ml 1个, 50ml和500ml各2个 ) 6. 试管（20ml，2个） 7. 漏斗(1个) 8. 试管夹(2个) 9. 纱布(15块) 10.离心机(1台)

实验试剂

2. 95%乙醇（预冷24h） 3. 蒸馏水 4. 柠檬酸钠(质量浓度0.1g/ml) 5. 氯化钠(2mol/L和0.015mol/L) 6. 二苯胺 7. 高氯酸 8.乙醛 9. 冰乙酸

方法步骤

1.制备实验材料。

实验前需要制备鸡血溶液，制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为0.1g/ml的溶液（抗凝剂）100ml，置于500ml烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180ml）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用1000rpm离心2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液（如果没有离心机，可以将烧杯中的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀）。

1．破碎细胞，获取含DNA的滤液

将制备好的鸡血细胞液5ml~10ml，注入到50ml烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20ml，同时用玻璃棒充分搅拌5min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500ml的烧杯中，取其滤液。

洋葱切碎后加入一定量的洗涤剂和食盐，充分地搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

2． 去除杂质

方案一：将氯化钠的物质的量浓度为2mol/L的溶液40ml加入到滤液中，这时DNA在溶液中呈溶解状态。过滤去除杂质，保留滤液。沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量的浓度相当于0.14mol/L）。再调节NaCl的浓度至0.14mol/L，析出含DNA的粘稠物，过滤保留滤出物质。然后用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。

方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min。

方案三：将滤液在60-75℃的恒温水浴箱中保温10-15min。

3．DNA的析出与鉴定

取1个100ml烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。加入冷却的、体积分数为95%的酒精溶液50ml（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含有杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA。注意观察丝状物是什么颜色。

取两支20ml的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0.015mol/L的溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。

实验现象

实验结论