实验编号 |
305#(高中生物,必修3) |
实验名称 |
探究培养液中酵母菌种群数量的变化 |
实验原理 |
酵母菌是单细胞真核生物,在生产与生活中常用来酿酒、发面包、做单细胞蛋白饲料等。由于其生长周期短、繁殖速度快,是研究种群数量的增长规律、各种因素对种群数量影响等的较好实验材料。 种群的群量变化包括增长、波动、稳定、下降等阶段,受许多环境因素如温度、PH、养分的种类与浓度等影响。 探究培养液中酵母菌种群的数量随时间的变化,能够为高效利用酵母菌提供依据,也能帮助构建种群增长的数学模型。 |
目的要求 |
1、通过探究培养液中酵母菌种群数量的变化,尝试构建种群增长的数学模型。 2、学会血球计数板的使用和细胞数目的计算方法。 |
实验材料 |
所需要的菌种 无菌马铃薯培养液或肉汤培养液(马铃薯20g、葡萄糖20g) |
实验仪器 |
试管30支、血球计数板(2mm×2mm×0.1mm方格)、移液管、显微镜等。 高压灭菌锅,恒温培养箱等 ,纱布、棉塞、棉线等 |
实验试剂 |
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方法步骤 |
1、无菌马铃薯培养液的配制、分装、灭菌: 1-1:取马铃薯20克,放在锅内蒸煮。过滤、取其滤液,加入20克葡萄糖,配成1000ML马铃薯培养液。 1-2:洁净试管30 支分3组,AB组备加5-10ML培养液。 谨防将培养液沾在试管口以防污染,并加盖棉塞。C组加入蒸馏水。 1-3:用高压锅进行___________灭菌后冷却至室温,标记甲、乙、丙等。 2、接种:将酵母菌母液分别加入试管各0.1ml, 接种时要在酒精灯附近,用1ML刻度管每次吸取1ML酵母菌母液 不要加太多,避免初始菌数过多。 摇匀后用______________计数起始酵母液个数,做好记录。 3、培养与计数:将各试管送进恒温箱,__28_℃下培养AC组、5℃下培养B组,共7天。每天用血球计数板,采用抽样检测的方法计数一个小方格内的酵母菌数量并作记录,可全班同学分组检测同一组样品,得平均数。 4、分析与结论 根据记录的数据,绘出曲线图。分析实验结果,酵母菌种群的数量随时间、温度变化的结果。 |
实验现象 |
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实验结论 |
1、根据表格平均值作出培养液中酵母菌种群数量7天中的变化曲线。 2、培养液酵母菌种群数量随时间呈__________型增长变化 |
马铃薯培养基(PDA):
称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸半个小时,纱布过滤,再加10-20g葡萄糖,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),15磅蒸气(121℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
酵母菌母液:取5G干酵母,加入50ML水中,35℃水浴1小时,使之活化。
构造:
1.血球计数板由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成,有四条下凹的槽分隔成三个平台,中间的平台较宽,并被较短横槽分隔为两半,构成两个计数区。
2.每个计数区都有刻了9个大方格的方格网,只有中间的一个大方格为计数室,其长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.
3.计数室通常有两种规格:25中方格×16小方格,16中方格×25小方格
不管哪种构造,每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。 所以每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用(以计数酵母菌为例)
(1) 样品稀释:目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可。
(2) 将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。
(3) 将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸走,计数室内不能有气泡。
稍待片刻4-5min,使酵母菌全部沉降到计数室底部,开始计数。
在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数,
(4) 计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
(5) 当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。
(6) 对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
每毫升菌数的换算公式:[N/(80或100)]×400×104×样品稀释倍数,单位:万个/mL
(7) 血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净,则必须重复清洗直到干净为止。
酵母菌种群数量记录表
血球计数板型号: □25中方格×16小方格 □16中方格×25小方格
计数 |
0d |
1d |
2d |
3d |
4d |
5d |
6d |
7d |
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1 |
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3 |
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2 |
3 |
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3 |
1 |
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3 |
1 |
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3 |
1 |
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3 |
1 |
2 |
3 |
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中格1 |
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中格2 |
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中格3 |
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中格4 |
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中格5 |
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小计(n) |
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平均值(N) |
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酵母菌数量 (万个/mL) |
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说明:
1.计数板型号为25中方格×16小方格的,取5个中格(共80小格)计数;计数板型号为16中方格×25小方格的,取4个中格(共100小格)计数。
2.位于分格线上的菌体,只数两条边上的:计上不计下,计左不计右。
3.将5个中格(80小格)或4个中格(100小格)的菌数相加,得每次抽样的小计(n);三次抽样的平均值为菌数N。
每毫升菌数的换算公式:[N/(80或100)]×400×104×样品稀释倍数,单位:万个/mL
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